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附件 1（略） 附件 2 托曲珠利溶液 说明书和标签 （一） 托曲珠利溶液 说明书 兽用 【兽药名称】 通用名称托曲珠利溶液 商品名称百球清 英文名称 Toltrazuril Solution 汉语拼音 Tuoquzhuli Rongye 【主要成分】 托曲珠利 【性状】 本品为无色至棕色澄清溶液。 【药理作用】 三嗪酮类广谱抗球虫药。杀球虫机理是干扰球虫细胞核的分裂和线粒体的呼吸及代谢功能，并使内质网膨大，出现空泡，从而使球虫死亡。对鸡的堆型、布氏、巨型、和缓、毒害和柔嫩艾美耳球虫，以及火鸡的腺状、大艾和小艾 等艾美耳球虫均具有杀灭作用，对其他抗球虫药耐药的虫株亦有效。主要作用于球虫裂殖生殖和配子生殖阶段，对球虫两个无性生殖周期均有作用，如抑制裂殖体、小配子体的核分裂和小配子体的壁形成体。不影响鸡对球虫产生免疫力，可用于治疗和预防禽球虫病。本品安全范围大，禽可耐受 10 倍以上的推荐剂量。 家禽内服后， 50以上被吸收。吸收后药物主要分布于肝和肾，且迅速被代谢成砜类化合物，在雏鸡体内的半衰期约为 2 天。 【适应证】 用于防治鸡球虫病。 【用法与用量】 以托曲珠利计。混饮每 1L 水，鸡 25mg，一日 1 次，连用 2 日。 【不 良反应】 按推荐的用法与用量使用，未见不良反应。 【注意事项】 1.请勿用于已知对本品过敏的动物。 2.稀释后的药液超过 48 小时不宜给鸡饮用。 3.同其他抗寄生虫类制剂，频繁和重复使用同一类活性物质的抗原虫药 或 低估活禽重量而导致用药不足，都有可能 产生 耐药性。 4.过量服用会导致饮用水摄入减少。在超过 10 倍以上推荐剂量时，曾观察到此现象。 5.药液稀释超过 1000 倍可能会析出结晶而影响药效。但过高的浓度会影响鸡的饮水量。 6.已知对活性成分过敏者应避免接触本品。使用本品时应佩戴安全防护手套。给药时，不得进食 、喝水或抽烟。用后洗手。该兽药制剂为碱性溶液。眼睛或皮肤接触后，需用大量干净的水冲洗接触区域。 7.请勿吞咽。如意外吞食，请立即就医，并出示说明书或标签。 8.未使用的兽药产品应由危险废物收集中心处理，如与生活垃圾一起处理，请务必注意防止其进入废水中。兽药产品不得进入废水或 通过 污水处理系统。 9.蛋鸡开产前 4 周及产蛋期禁用。 【休药期】 鸡 16 日。 【规格】 （ 1） 100ml∶ 2.5g （ 2） 1000ml∶ 25g 【包装】 （ 1） 100ml/瓶 （ 2） 1000ml/瓶 【贮藏】 密封，在凉暗干燥处保存。 【 有效期】 24 个月。 【批准文号】 【生产企业】 拜耳（四川）动物保健有限公司 地址 四川省成都市西南航空港经济开发区长城路一段 189 号 （ 二 ） 托曲珠利溶液 标签 兽用 【兽药名称】 通用名称托曲珠利溶液 商品名称百球清 英文名称 Toltrazuril Solution 汉语拼音 Tuoquzhuli Rongye 【主要成分】 托曲珠利 【性状】 本品为无色至棕色澄清溶液。 【适应证】 用于防治鸡球虫病。 【用法与用量】 以托曲珠利计。混饮每 1L 水，鸡 25mg，一日 1 次，连用 2 日。 【规格】 （ 1） 100ml∶ 2.5g （ 2） 1000ml∶ 25g 【生产日期】 【生产批号】 【有效期】 至 【休药期】 鸡 16 日。 【贮藏】 密封，在凉暗干燥处保存。 【 包装】 （ 1） 100ml/瓶 （ 2） 1000ml/瓶 【生产企业】 拜耳（四川）动物保健有限公司 地址四川省成都市西南航空港经济开发区长城路一段 189 号 附件 3 托曲珠利 每日允许摄入量（ ADI） 和最高残留限量（ MRLs）（试行） 申报单位参照欧盟有关标准制定了 托曲珠利 的每日允许摄入量（ ADI）和 托曲珠利 在 牛 组织中的最高残留限量（ MRL），如下表 活性成分 残留 标示物 动物 品种 靶组织 MRLs 托曲珠利 ADI 0～ 2μg/kg b.w./d 托曲珠利砜 牛 肌肉 100μgkg-1 脂肪 150μgkg-1 肝脏 500μgkg-1 肾脏 250μgkg-1 附件 4 托曲珠利砜 残留检测方法标准（试行） 动物源性食品中托曲珠利砜残留量的测定 液相色谱 -串联质谱法（试行） 1 范围 本标准规定了动物组织中托曲珠利砜残留检测的制样和液相色谱 -串联质谱测定方法。 本 标准 适用于牛、 猪、鸡的肌肉、脂肪（脂肪 皮肤）、肝脏和肾脏 中托曲珠利砜残留量的检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 1.1-2000 标准化工作导则 第 1 部分标准的结构和编写规则 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 原理 试料中残留的托曲珠利砜用含内标的 0.1甲酸乙腈提取 ，离心，上清液过滤膜后，用液相色谱-串联质谱法测定，内标法定量。 4 试剂和材料 以下所用 的 试剂 ， 除 特别注 外均为分析纯 试剂； 水为符合 GB/T 6682规定的一级水。 4.1 甲醇 色谱纯。 4.2 乙腈 色谱纯。 4.3 甲酸 色谱纯。 4.4 甲酸铵 。 4.5 50乙腈溶液 取 500mL 乙腈和 500mL 水， 混合均匀 。 4.6 0.1甲酸乙腈 准确量取 1.0 mL 甲酸，转移入 1000 mL 容量瓶，用乙腈定容至刻度，混合均匀。 4.7 含甲酸的 10mmol/L 甲酸铵水溶液 准确称取 0.63g 甲酸铵，溶于水 中，转移到 1000mL 容量瓶，加 0.12mL 甲酸，用水定容至刻度，混合均匀。 4.8 含甲酸的 10mmol/L 甲酸铵甲醇溶液 准确称取 0.63g 甲酸铵，溶于甲醇中，转移到 1000mL 容量瓶，加入 0.12mL 甲酸，加甲醇定容至刻度，混合均匀。 4.9 托曲珠利砜（ CAS 69004-04-2）对照品 纯度 ≥98.0。 4.10 托曲珠利砜（ N-甲基 -d3）同位素（ CAS 1346602-48-9）内标对照品 纯度 ≥98.0。 4.11 1mg/mL 托曲珠利砜标准储备液 精密称取相当于 10.0 mg 托曲珠利砜 的 对照 品，用乙腈溶解并定容至 10mL 量瓶中。在 7℃ 或更低温度条件下保存，有效期 3 个月。 4.12 1mg/mL 托曲珠利砜（ N-甲基 -d3）内标储备液 精密称取经折算相当于 10.0 mg 托曲珠利砜（ N-甲基 -d3）的 对照 品，用乙腈溶解并定容至 10mL 量瓶中。 4.13 托曲珠利砜标准工作溶液 取 1mL 托曲珠利砜标准储备液，用乙腈稀释并定容至 100mL 量瓶中。根据检测需要移取一定体积的标准储备液用乙腈逐级稀释成适当浓度的标准工作溶液。在 7℃或更低温度条件下保存，有效期 3 个月。 4.14 托曲珠利砜（ N-甲基 -d3）内标溶液 取 1mL 托曲珠利砜（ N-甲基 -d3）内标储备液，用 50乙腈溶液稀释并定容至 100mL 量瓶中。根据检测需要移取一定体积的内标储备液用 50乙腈逐级稀释成适当浓度的内标标准工作溶液。在 7℃ 或更低温度条件下保存，有效期 3 个月。 4.15 0.1mg/L 托曲珠利砜（ N-甲基 -d3）内标提取液 准确量取适量托曲珠利砜（ N-甲基 -d3）内标溶液，用 0.1甲酸乙腈配制成浓度为 0.1mg/L 的内标提取液。 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱 -串联质谱仪 配电喷雾离子源。 5.2 分析天平 感量 0.00001g。 5.3 天平 感量 0.01g。 5.4 涡旋混合器。 5.5 高速冷冻离心机。 5.6 组织匀浆机。 5.7 摇床。 5.8 超声波清洗机。 5.9 微孔滤膜 孔径 0.2μm。 5.10 移液器 容量 10μL、 20～ 200μL、 100～ 1000μL、 1000～ 5000μL。 6 试料的制备与保存 6.1 试料的制备 取适量新鲜或 解 冻的空白或供试组织，绞碎并使均质。 取均质后的供试样品，作为供试试料。 取均质后的空白样品，作为空白试料。 取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为 空白添加试料。 6.2 试料的保存 -18℃ 以 下保存。 7 测定 步骤 7.1 样品前处理 称量试样 2（ ±0.01） g， 置于 50mL 离心管中 ， 加入 20mL 0.1mg/L 托曲珠利砜 （ N-甲基 -d3） 内标 提取液 ， 涡旋 ， 剧烈震荡 15s， 超声浴 5min， 40r/min 摇床振荡 30min， 于 5℃ 、 4000r/min 离心15min。取上清液经 0.2μm 微孔滤膜后，供液相色谱 -串联质谱测定。 7.2 基质匹配 标准曲线的制备 在 提取后的 空白动物组织基质匹配液中，添加不同量的托曲珠利砜 标准工作溶液 ，绘制托曲珠利砜的标准曲线。 牛肝脏基质匹 配液中托曲珠利砜浓度为 10、 25、 50、 75、 100、 150μg/L，牛肾脏基质匹配液中托曲珠利砜浓度为 5、 10、 12.5、 25、 50、 70μg/L，牛肌肉基质匹配液中托曲珠利砜浓度为 2、 5、10、 20、 50、 100μg/L，牛脂肪基质匹配液中托曲珠利砜浓度为 2、 5、 10、 15、 30、 50μg/L。 猪肝脏基质匹配液中托曲珠利砜浓度为 10、 25、 50、 75、 100、 120μg/L，猪肾脏基质匹配液中托曲珠利砜浓度为 5、 10、 12.5、 25、 50、 70μg/L，猪肌肉基质匹配液中托曲珠利砜浓度为 3、 5、10、 15、 20、 30μg/L，猪皮肤 脂肪基质匹配液中托曲珠利砜浓度为 5、 7.5、 10、 15、 30、 50μg/L。 鸡肝脏基质匹配液中托曲珠利砜浓度为 15、 30、 60、 75、 120、 150μg/L，鸡肾脏基质匹配液中托曲珠利砜浓度为 15、 20、 40、 60、 80、 100μg/L，鸡肌肉基质匹配液中托曲珠利砜 浓度为 3、 5、7.5、 10、 15、 20、 30μg/L，鸡皮肤 脂肪基质匹配液中托曲珠利砜浓度为 7.5、 10、 15、 20、 40、 50μg/L。 上述基质匹配液中，内标托曲珠利砜（ N-甲基 -d3）浓度均为 100μg/L。 采用内标法计算， 以测得的托曲珠利砜及内标托曲珠利砜（ N-甲基 -d3）的定量离子质量色谱峰面积之比为纵坐标，对应的托曲珠利砜浓度为横坐标，绘制标准曲线，求 线性 回归方程和相关系数。 7.3 测定 7.3.1 液相色谱参考条件 色谱柱 C18（ 4.61 50mm， 5μm） ， 或相当者； 流动相 A相为含甲酸的 10mmol/L 甲酸铵水溶液 ； B相为含甲酸的 10mmol/L 甲酸铵甲醇溶液 ； 流速 0.5mL/min； 柱温 60℃ ； 进样量 5μL； 梯度洗脱 梯度 程序 见表 1； 表 1 梯度洗脱程序 时间（ min） 流速（ mL/min） 流动相 A （ ） 流动相 B（ ） 0 0.5 90 10 1.0 0.5 90 10 5.5 0.5 5 95 9.0 0.5 90 10 13.0 0.5 90 10 7.3.2 质谱参考条件 离子源 电喷雾离子 源 扫描方式 负离子扫描 检测方式 多反应监测 电离电 压 4.0KV 雾化温度 300℃ 雾化气流速 8L/min 测试药物定性、定量离子对及对应的裂解电压、碰撞能量见表 2。 表 2 托曲珠利砜及其内标的定性、定量离子对及裂解电压、碰撞能量 化合物名称 离子对（ m/z） 裂解电压（ V） 碰撞能量（ eV） 托曲珠利砜 456.0/399.0 120 10 456.0/42.2 a 120 24 托曲珠利砜 （ N-甲基-d3） 459.0/42.2 120 20 （ a定量离子对） 注以上参数为 Agilent Technologies 6470 测定托曲珠利砜的 最适参数。对于不同仪器，参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳。另外，应对上述参数定期检查，如有必要，应相应调整。 7.3.3 测定 法 取试样溶液和相应的基质加标标准溶液，作单点或多点校准 ， 按内标法以峰面积比计算。对照溶液及试样溶液中托曲珠利砜和托曲珠利砜（ N-甲基 -d3）的响应值均应在仪器检测的线性范围之内。试样溶液中的离子相对丰度与标准溶液的离子相对丰度比符合表 3 的要求。标准溶液和空白组织添加试样溶液的各特征离子的质量色谱图见附录 B。 表 3 试样溶液中离子相对丰度的允许偏差范围 相对离子丰度 50 20至 50 10至 20 ≤10 允许的相对偏差 ±20 ±25 ±30 ±50 7.4 空白试验 取空白试料 ，采用完全相同的步骤进行平行操作。 8 结果计算与表述 单点校准 issisissis CAA CCAA C （ 1） 或标准曲线校准由 bCCaAA iss iss 求得 a和 b，则 C bAAaC isis （ 2） 试料中托曲珠利砜残留量按式（ 3）计算 mCVX （ 3） 式中 C 试样溶液中托曲珠利砜的浓度， ng/mL； Cis 试样溶液中托曲珠利砜（ N-甲基 -d3）的浓度 ， ng/mL； Cs 标准溶液中托曲珠利砜的浓度， ng/mL； C’is 标准溶液中托曲珠利砜（ N-甲基 -d3）的浓度， ng/mL； A 试样溶液中托曲珠利砜的峰面积； Ais 试样溶液中托曲珠利砜（ N-甲基 -d3）的峰面积； As 标准溶液中托曲珠利砜的峰面积； A’is 标准溶液中托曲珠利砜（ N-甲基 -d3） 的峰面积； X 试料中 托 曲珠利砜残留量， µg/kg； V 提取物的最终 体积， mL； m 组织样品的质量， g。 注计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。 9 检测方法灵敏度、准确度和精密度 9.1 灵敏度 本方法在猪、牛 和 鸡 的 肝脏、肾脏、肌肉、脂肪的 检测限 均 为 20μg/kg， 牛 和 猪的肝脏、肾脏、肌肉、脂肪 定量限分别为 250、 125、 50、 75µg/kg， 鸡肝脏、肾脏、肌肉、皮肤 脂肪定量限分别为 300、200、 50、 100µg/kg。 9.2 准确度 本方法 托曲珠利砜在牛肌肉 50µg/kg～ 200µg/kg、牛肝脏 250µg/kg～ 1000µg/kg、牛肾脏125µg/kg～ 500µg/kg、牛脂肪 75µg/kg～ 300µg/kg；猪肌肉 50µg/kg～ 200µg/kg、猪肝脏 250µg/kg～1000µg/kg、猪肾脏 125µg/kg～ 500µg/kg、猪皮脂 75µg/kg～ 300µg/kg、 鸡肌肉 50µg/kg～ 200µg/kg、鸡肝脏 300µg/kg～ 1200µg/kg、鸡肾脏 200µg/kg～ 800µg/kg、鸡皮脂 100µg/kg～ 400µg/kg 的 添加浓度水平上， 回收率均为 70～ 110。 9.3 精密度 本方法 的 批内变异系数 ≤ 20，批间变异系数 ≤ 20。 附录 A （资料性附录） 托曲珠利砜 及托曲珠利砜 （ N-甲基 -d3） 内标 对照品信息 名称 托曲珠利砜 托曲珠利砜（ N-甲基 -d3） 分子式 C18H14F3N3O6S C18D3H11F3N3O6S 分子量 457.38 460.40 纯度 ≥98.0 ≥98.0 结构式 附录 B （资料性附录） 托曲珠利砜特征离子质量色谱图 图 B. 1 托曲珠利砜及内标托曲珠利砜 -d3标准溶液特征离子质量色谱图 （上图托曲珠利砜 -d3 50μg/L； 下图托曲珠利砜 50μg/L） 2 x10 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 8.647 1 1 2 x10 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 8.651 1 1 Counts vs. Acquisition Time min 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 图 B. 2 空白牛肝脏特征离子质量色谱图 图 B. 3 牛肝脏基质添加托曲珠利砜及内标 特征离子质量色谱图 （上图托曲珠利砜 -d3 100μg/L； 下图托曲珠利砜 10μg/L） 图 B. 4 牛肝脏中添加托曲珠利砜及内标 特征离子质量 色谱图 （ 上图托曲 珠利砜 -d3 100μg/L； 下图托曲珠利砜 250μg/kg） 2 x10 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1 1 2 x10 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1 1 Counts v s. Acquisition Time min 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 图 B. 5 空白猪肝脏特征离子质量色谱图 图 B. 6 猪肝脏基质添加托曲珠利砜及内标特征离子质量色谱图 （上图托曲珠利砜 -d3 100μg/L； 下图托曲珠利砜 10μg/L） 图 B. 7 猪 肝脏中添加托曲珠利砜及内标 特征离子质量 色谱图 （ 上图托曲珠利砜 -d3 100μg/L； 下图托曲珠利砜 250μg/kg） 2 x10 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1 1 2 x10 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1 1 Counts v s. Acquisition Time min 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 图 B. 8 空白鸡肝脏特征离子质 量色谱图 图 B. 9 鸡肝脏基质添加托曲珠利砜及内标特征离子质量色谱图 （上图托曲珠利砜 -d3 100μg/L； 下图托曲珠利砜 15μg/L） 图 B. 10 鸡 肝脏中添加托曲珠利砜及内标 特征离子质量 色谱图 （ 上图托曲珠利砜 -d3 100μg/L； 下图托曲珠利砜 300μg/kg） 2 x10 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1 1 2 x10 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1 1 Counts v s. Acquisition Time min 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
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