资源描述：
中 华 人 民 共 和 国 国 家 环 境 保 护 标 准 H J 3 4 7 . 1 - 2 0 1 8 部 分 代 替 H J / T 3 4 7 - 2 0 0 7 水 质 粪 大 肠 菌 群 的 测 定 滤 膜 法 W a t e r q u a l i t y D e t e r m i n a t i o n o f f e c a l c o l i f o r m M e m b r a n e f i l t r a t i o n （ 发 布 稿 ） 本 电 子 版 为 发 布 稿 。 请 以 中 国 环 境 出 版 集 团 出 版 的 正 式 标 准 文 本 为 准 。 2 0 1 8 - 1 2 - 2 6 发 布 2 0 1 9 - 0 6 - 0 1 实 施 生 态 环 境 部 发 布i 目 次 前 言 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . i i 1 适 用 范 围 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 2 规 范 性 引 用 文 件 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 3 术 语 和 定 义 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 4 方 法 原 理 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 5 干 扰 和 消 除 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 6 试 剂 和 材 料 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 7 仪 器 和 设 备 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 8 样 品 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 9 分 析 步 骤 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 1 0 结 果 计 算 与 表 示 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5 1 1 精 密 度 和 准 确 度 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6 1 2 质 量 保 证 和 质 量 控 制 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6 1 3 废 物 处 理 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7 1 4 注 意 事 项 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 7 附 录 A （ 资 料 性 附 录 ） 粪 大 肠 菌 群 检 验 记 录 及 报 告 格 式 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8ii 前 言 为 贯 彻 中 华 人 民 共 和 国 环 境 保 护 法 和 中 华 人 民 共 和 国 水 污 染 防 治 法 ， 保 护 生 态 环 境 ， 保 障 人 体 健 康 ， 规 范 水 中 粪 大 肠 菌 群 的 测 定 方 法 ， 制 定 本 标 准 。 本 标 准 规 定 了 测 定 地 表 水 、 地 下 水 、 生 活 污 水 和 工 业 废 水 中 粪 大 肠 菌 群 的 滤 膜 法 。 本 标 准 是 对 水 质 粪 大 肠 菌 群 的 测 定 多 管 发 酵 法 和 滤 膜 法 （ 试 行 ） （ H J / T 3 4 7 - 2 0 0 7 ） 滤 膜 法 部 分 的 修 订 。 本 标 准 首 次 发 布 于 2 0 0 7 年 ， 原 起 草 单 位 为 中 国 环 境 监 测 总 站 。 本 次 为 第 一 次 修 订 。 本 次 修 订 的 主 要 内 容 如 下 完 善 了 方 法 原 理 的 表 述 ； 增 加 了 检 出 限 ； 增 加 了 规 范 性 引 用 文 件 、 术 语 和 定 义 、 干 扰 和 消 除 、 仪 器 和 设 备 、 样 品 采 集 、 样 品 保 存 、 精 密 度 和 准 确 度 、 质 量 保 证 和 质 量 控 制 、 废 物 处 理 等 章 节 ； 自 本 标 准 实 施 之 日 起 ， 水 质 粪 大 肠 菌 群 的 测 定 多 管 发 酵 法 和 滤 膜 法 （ 试 行 ） （ H J / T 3 4 7 - 2 0 0 7 ） 废 止 。 本 标 准 的 附 录 A 为 资 料 性 附 录 。 本 标 准 由 生 态 环 境 部 生 态 环 境 监 测 司 、 法 规 与 标 准 司 组 织 制 订 。 本 标 准 起 草 单 位 辽 宁 省 环 境 监 测 实 验 中 心 。 本 标 准 验 证 单 位 大 连 市 环 境 监 测 中 心 、 丹 东 市 环 境 监 测 中 心 站 、 锦 州 市 环 境 监 测 中 心 站 、 辽 阳 市 环 境 监 测 站 、 铁 岭 市 环 境 保 护 监 测 站 和 沈 阳 市 疾 病 预 防 控 制 中 心 。 本 标 准 生 态 环 境 部 2 0 1 8 年 1 2 月 2 6 日 批 准 。 本 标 准 自 2 0 1 9 年 6 月 1 日 起 实 施 。 本 标 准 由 生 态 环 境 部 解 释 。1 水 质 粪 大 肠 菌 群 的 测 定 滤 膜 法 1 适 用 范 围 本 标 准 规 定 了 测 定 水 中 粪 大 肠 菌 群 的 滤 膜 法 。 本 标 准 适 用 于 地 表 水 、 地 下 水 、 生 活 污 水 和 工 业 废 水 中 粪 大 肠 菌 群 的 测 定 。 本 方 法 的 检 出 限 当 接 种 量 为 1 0 0 m l 时 ， 检 出 限 为 1 0 C F U / L ； 当 接 种 量 为 5 0 0 m l 时 ， 检 出 限 为 2 C F U / L 。 2 规 范 性 引 用 文 件 本 标 准 引 用 了 下 列 文 件 或 其 中 的 条 款 。 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 有 效 版 本 适 用 于 本 标 准 。 G B / T 1 4 5 8 1 水 质 湖 泊 和 水 库 采 样 技 术 指 导 H J 4 9 4 水 质 采 样 技 术 指 导 H J / T 9 1 地 表 水 和 污 水 监 测 技 术 规 范 3 术 语 和 定 义 下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 本 标 准 。 3 . 1 粪 大 肠 菌 群 f e c a l c o l i f o r m s 又 称 耐 热 大 肠 菌 群 （ t h e r m o t o l e r a n t c o l i f o r m s ） 。 4 4 . 5 ℃ 培 养 2 4 h ， 能 在 M F C 选 择 性 培 养 基 上 生 长 ， 发 酵 乳 糖 产 酸 ， 并 形 成 蓝 色 或 蓝 绿 色 菌 落 的 肠 杆 菌 科 细 菌 。 3 . 2 菌 落 形 成 单 位 c o l o n y - f o r m i n g u n i t s （ C F U ） 单 位 体 积 样 品 中 的 细 菌 群 落 总 数 。 4 方 法 原 理 样 品 通 过 孔 径 为 0 . 4 5 μ m 的 滤 膜 过 滤 ， 细 菌 被 截 留 在 滤 膜 上 ， 然 后 将 滤 膜 置 于 M F C 选 择 性 培 养 基 上 ， 在 特 定 的 温 度 （ 4 4 . 5 ℃ ） 下 培 养 2 4 h ， 胆 盐 三 号 可 抑 制 革 兰 氏 阳 性 菌 的 生 长 ， 粪 大 肠 菌 群 能 生 长 并 发 酵 乳 糖 产 酸 使 指 示 剂 变 色 ， 通 过 颜 色 判 断 是 否 产 酸 ， 并 通 过 呈 蓝 色 或 蓝 绿 色 菌 落 计 数 ， 测 定 样 品 中 粪 大 肠 菌 群 浓 度 。 5 干 扰 和 消 除 5 . 1 活 性 氯 具 有 氧 化 性 ， 能 破 坏 微 生 物 细 胞 内 的 酶 活 性 ， 导 致 细 胞 死 亡 ， 可 在 样 品 采 集 （ 8 . 1 ）2 时 加 入 硫 代 硫 酸 钠 溶 液 （ 6 . 6 ） 消 除 干 扰 。 5 . 2 重 金 属 离 子 具 有 细 胞 毒 性 ， 能 破 坏 微 生 物 细 胞 内 的 酶 活 性 ， 导 致 细 胞 死 亡 ， 可 在 样 品 采 集 （ 8 . 1 ） 时 加 入 乙 二 胺 四 乙 酸 二 钠 溶 液 （ 6 . 7 ） 消 除 干 扰 。 6 试 剂 和 材 料 除 非 另 有 说 明 ， 分 析 时 均 使 用 符 合 国 家 标 准 的 分 析 纯 试 剂 或 生 物 试 剂 ， 实 验 用 水 为 蒸 馏 水 或 去 离 子 水 。 6 . 1 M F C 培 养 基 。 胰 胨 1 0 g 蛋 白 胨 5 g 酵 母 浸 膏 3 g 氯 化 钠 5 g 乳 糖 1 2 . 5 g 胆 盐 三 号 1 . 5 g 1 苯 胺 蓝 水 溶 液 1 0 m l 1 玫 瑰 红 酸 溶 液 （ 溶 于 8 . 0 g / L 氢 氧 化 钠 液 中 ） 1 0 m l 将 上 述 培 养 基 中 的 成 分 （ 除 苯 胺 蓝 和 玫 瑰 红 酸 外 ） ， 溶 解 于 1 0 0 0 m l 水 中 ， 调 节 p H 至 7 . 4 ， 分 装 于 三 角 烧 瓶 内 ， 于 1 1 5 ℃ 高 压 蒸 汽 灭 菌 2 0 m i n ， 储 存 于 冷 暗 处 备 用 。 临 用 前 ， 按 上 述 配 方 比 例 ， 用 灭 菌 吸 管 分 别 加 入 已 煮 沸 灭 菌 的 1 苯 胺 蓝 水 溶 液 1 m l 及 1 玫 瑰 红 酸 溶 液 （ 溶 于 8 . 0 g / L 氢 氧 化 钠 液 中 ） 1 m l ， 混 合 均 匀 。 如 培 养 物 中 杂 菌 不 多 ， 则 不 加 玫 瑰 红 酸 亦 可 。 加 热 溶 解 前 ， 加 入 1 . 2 ～ 1 . 5 琼 脂 可 制 成 固 体 培 养 基 。 也 可 选 用 市 售 成 品 培 养 基 。 配 制 好 的 培 养 基 避 光 、 干 燥 保 存 ， 必 要 时 在 5 ℃ ± 3 ℃ 冰 箱 中 保 存 ， 分 装 到 平 皿 中 的 培 养 基 可 保 存 2 ～ 4 周 。 配 制 好 的 培 养 基 不 能 进 行 多 次 融 化 操 作 ， 以 少 量 勤 配 为 宜 。 当 培 养 基 颜 色 变 化 ， 或 脱 水 明 显 时 应 废 弃 不 用 。 6 . 2 无 菌 滤 膜 直 径 5 0 m m ， 孔 径 0 . 4 5 μ m 的 醋 酸 纤 维 滤 膜 ， 按 无 菌 操 作 要 求 包 扎 ， 经 1 2 1 ℃ 高 压 蒸 汽 灭 菌 2 0 m i n ， 晾 干 备 用 ； 或 将 滤 膜 放 入 烧 杯 中 ， 加 入 实 验 用 水 ， 煮 沸 灭 菌 3 次 ， 1 5 m i n / 次 ， 前 2 次 煮 沸 后 需 更 换 水 洗 涤 2 ～ 3 次 。 6 . 3 无 菌 水 取 适 量 实 验 用 水 ， 经 1 2 1 ℃ 高 压 蒸 汽 灭 菌 2 0 m i n ， 备 用 。 6 . 4 硫 代 硫 酸 钠 （ N a 2 S 2 O 3 · 5 H 2 O ） 。 6 . 5 乙 二 胺 四 乙 酸 二 钠 （ C 1 0 H 1 4 N 2 O 8 N a 2 · 2 H 2 O ） 。 6 . 6 硫 代 硫 酸 钠 溶 液 ρ （ N a 2 S 2 O 3 ） 0 . 1 0 g / m l 称 取 1 5 . 7 g 硫 代 硫 酸 钠 （ 6 . 4 ） ， 溶 于 适 量 水 中 ， 定 容 至 1 0 0 m l ， 临 用 现 配 。 6 . 7 乙 二 胺 四 乙 酸 二 钠 溶 液 ρ （ C 1 0 H 1 4 N 2 O 8 N a 2 · 2 H 2 O ） 0 . 1 5 g / m l 称 取 1 5 g 乙 二 胺 四 乙 酸 二 钠 （ 6 . 5 ） ， 溶 于 适 量 水 中 ， 定 容 至 1 0 0 m l ， 此 溶 液 可 保 存 3 0 d 。 7 仪 器 和 设 备 7 . 1 采 样 瓶 1 L 、 5 0 0 m l 或 2 5 0 m l 带 螺 旋 帽 或 磨 口 塞 的 广 口 玻 璃 瓶 。3 7 . 2 高 压 蒸 汽 灭 菌 器 1 1 5 ℃ 、 1 2 1 ℃ 可 调 。 7 . 3 恒 温 培 养 箱 允 许 温 度 偏 差 4 4 . 5 ℃ ± 0 . 5 ℃ 。 7 . 4 过 滤 装 置 配 有 砂 芯 滤 器 和 真 空 泵 ， 抽 滤 压 力 勿 超 过 - 5 0 k P a 。 7 . 5 p H 计 准 确 到 0 . 1 p H 单 位 。 7 . 6 培 养 皿 直 径 9 0 m m 。 7 . 7 一 般 实 验 室 常 用 仪 器 和 设 备 。 注玻璃器皿及采样器具试验前要按无菌操作要求包扎，1 2 1 ℃高压蒸汽灭菌 2 0 m i n 备用。 8 样 品 8 . 1 样 品 采 集 点 位 布 设 及 采 样 频 次 按 照 G B / T 1 4 5 8 1 、 H J / T 4 9 4 和 H J / T 9 1 的 相 关 规 定 执 行 。 采 集 微 生 物 样 品 时 ， 采 样 瓶 （ 7 . 1 ） 不 得 用 样 品 洗 涤 ， 采 集 样 品 于 灭 菌 的 采 样 瓶 中 。 样 品 采 集 量 可 根 据 水 体 实 际 情 况 而 定 ， 一 般 不 少 于 2 5 0 m l 。 采 集 河 流 、 湖 库 等 地 表 水 样 品 时 ， 可 握 住 瓶 子 下 部 直 接 将 带 塞 采 样 瓶 插 入 水 中 ， 约 距 水 面 1 0 ～ 1 5 c m 处 ， 瓶 口 朝 水 流 方 向 ， 拔 瓶 塞 ， 使 样 品 灌 入 瓶 内 然 后 盖 上 瓶 塞 ， 将 采 样 瓶 从 水 中 取 出 。 如 果 没 有 水 流 ， 可 握 住 瓶 子 水 平 往 前 推 。 采 样 量 一 般 为 采 样 瓶 容 量 的 8 0 左 右 。 样 品 采 集 完 毕 后 ， 迅 速 扎 上 无 菌 包 装 纸 。 从 龙 头 装 置 采 集 样 品 时 ， 不 要 选 用 漏 水 龙 头 ， 采 水 前 将 龙 头 打 开 至 最 大 ， 放 水 3 ～ 5 m i n ， 然 后 将 龙 头 关 闭 ， 用 火 焰 灼 烧 约 3 m i n 灭 菌 或 用 7 0 ～ 7 5 的 酒 精 对 龙 头 进 行 消 毒 ， 开 足 龙 头 ， 再 放 水 1 m i n ， 以 充 分 除 去 水 管 中 的 滞 留 杂 质 。 采 样 时 控 制 水 流 速 度 ， 小 心 接 入 瓶 内 。 采 集 地 表 水 、 废 水 样 品 及 一 定 深 度 的 样 品 时 ， 也 可 使 用 灭 菌 过 的 专 用 采 样 装 置 采 样 。 在 同 一 采 样 点 进 行 分 层 采 样 时 ， 应 自 上 而 下 进 行 ， 以 免 不 同 层 次 的 搅 扰 。 如 果 采 集 的 是 含 有 活 性 氯 样 品 ， 需 在 采 样 瓶 灭 菌 前 加 入 硫 代 硫 酸 钠 溶 液 （ 6 . 6 ） ， 以 除 去 活 性 氯 对 细 菌 的 抑 制 作 用 （ 每 1 2 5 m l 容 积 加 入 0 . 1 m l 的 硫 代 硫 酸 钠 溶 液 ） ； 如 果 采 集 的 是 重 金 属 离 子 含 量 较 高 的 样 品 ， 则 在 采 样 瓶 灭 菌 前 加 入 乙 二 胺 四 乙 酸 二 钠 溶 液 （ 6 . 7 ） ， 以 消 除 干 扰 （ 每 1 2 5 m l 容 积 加 入 0 . 3 m l 的 乙 二 胺 四 乙 酸 二 钠 溶 液 ） 。 注 1 5 . 7 m g 硫代硫酸钠 （6 . 4 ） 可去除样品中 1 . 5 m g 活性氯， 硫代硫酸钠用量可根据样品实际活性氯 量调整。 8 . 2 样 品 保 存 采 样 后 应 在 2 h 内 检 测 ， 否 则 ， 应 1 0 ℃ 以 下 冷 藏 但 不 得 超 过 6 h 。 实 验 室 接 样 后 ， 不 能 立 即 开 展 检 测 的 ， 将 样 品 在 4 ℃ 以 下 冷 藏 并 在 2 h 内 检 测 。 9 分 析 步 骤 9 . 1 样 品 过 滤 根 据 样 品 的 种 类 判 断 接 种 量 ， 最 小 过 滤 体 积 为 1 0 m l ， 如 接 种 量 小 于 1 0 m l 时 应 逐 级 稀 释 。4 先 估 计 出 适 合 在 滤 膜 上 计 数 所 使 用 的 体 积 ， 然 后 再 取 这 个 体 积 的 1 / 1 0 和 1 0 倍 ， 分 别 过 滤 。 理 想 的 样 品 接 种 量 是 滤 膜 上 生 长 的 粪 大 肠 菌 群 菌 落 数 为 2 0 ～ 6 0 个 ， 总 菌 落 数 不 得 超 过 2 0 0 个 。 当 最 小 过 滤 体 积 为 1 0 m l ， 滤 膜 上 菌 落 密 度 仍 过 大 时 ， 则 应 对 样 品 进 行 稀 释 。 1 1 0 稀 释 的 方 法 为 吸 取 1 0 m l 样 品 ， 注 入 盛 有 9 0 m l 无 菌 水 （ 6 . 3 ） 的 三 角 烧 瓶 中 ， 混 匀 ， 制 成 1 1 0 稀 释 样 品 。 样 品 接 种 量 参 考 表 见 表 1 。 表 1 接 种 量 参 考 表 样品类型 接种量（ m l ） 1 0 0 1 0 1 0 . 1 1 0 - 2 1 0 - 3 1 0 - 4 1 0 - 5 地表水 水源水 ▲ ▲ ▲ 湖泊（水库） ▲ ▲ ▲ 河流 ▲ ▲ ▲ 废水 生活污水 ▲ ▲ ▲ 工业废水 处理前 ▲ ▲ ▲ 处理后 ▲ ▲ ▲ 地下水 ▲ ▲ ▲ 用 灭 菌 镊 子 以 无 菌 操 作 夹 取 无 菌 滤 膜 （ 6 . 2 ） 贴 放 在 已 灭 菌 的 过 滤 装 置 （ 7 . 4 ） 上 ， 固 定 好 过 滤 装 置 ， 将 样 品 充 分 混 匀 后 抽 滤 ， 以 无 菌 水 （ 6 . 3 ） 冲 洗 器 壁 2 ～ 3 次 。 样 品 过 滤 完 成 后 ， 再 抽 气 约 5 s ， 关 上 开 关 。 9 . 2 培 养 用 灭 菌 镊 子 夹 取 滤 膜 移 放 在 M F C 培 养 基 （ 6 . 1 ） 上 ， 滤 膜 截 留 细 菌 面 向 上 ， 滤 膜 应 与 培 养 基 完 全 贴 紧 ， 两 者 间 不 得 留 有 气 泡 ， 然 后 将 培 养 皿 倒 置 ， 放 入 恒 温 培 养 箱 内 ， 4 4 . 5 ℃ ± 0 . 5 ℃ 培 养 2 4 h ± 2 h 。 9 . 3 对 照 试 验 9 . 3 . 1 空 白 对 照 每 次 试 验 都 要 用 无 菌 水 （ 6 . 3 ） 按 照 步 骤 9 . 1 和 9 . 2 进 行 实 验 室 空 白 测 定 。 9 . 3 . 2 阳 性 及 阴 性 对 照 将 粪 大 肠 菌 群 的 阳 性 菌 株 （ 如 大 肠 埃 希 氏 菌 E s c h e r i c h i a c o l i ） 和 阴 性 菌 株 （ 如 产 气 肠 杆 菌 E n t e r o b a c t e r a e r o g e n e s ） 制 成 浓 度 为 4 0 ～ 6 0 0 C F U / L 的 菌 悬 液 ， 分 别 按 照 9 . 1 ～ 9 . 2 步 骤 培 养 ， 阳 性 菌 株 应 呈 现 阳 性 反 应 ， 阴 性 菌 株 应 呈 现 阴 性 反 应 ， 否 则 ， 该 次 样 品 测 定 结 果 无 效 ， 应 查 明 原 因 后 重 新 测 定 。5 1 0 结 果 计 算 与 表 示 1 0 . 1 结 果 判 读 M F C 培 养 基 上 呈 蓝 色 或 蓝 绿 色 的 菌 落 为 粪 大 肠 菌 群 菌 落 ， 予 以 计 数 。 M F C 培 养 基 上 呈 灰 色 、 淡 黄 色 或 无 色 的 菌 落 为 非 粪 大 肠 菌 群 菌 落 ， 不 予 计 数 。 结 果 判 读 参 考 图 片 见 图 1 。 图 1 结 果 判 读 参 考 图 片 1 0 . 2 结 果 计 算 样 品 中 的 粪 大 肠 菌 群 数 （ C F U / L ） ， 按 照 公 式 （ 1 ） 进 行 计 算 1 1000 C C f （ 1 ） 阳性菌落 阴性菌落 （箭头指示处） 无菌落生长6 式 中 C 样 品 中 粪 大 肠 菌 群 数 ， C F U / L ； C 1 滤 膜 上 生 长 的 粪 大 肠 菌 群 菌 落 总 数 ， 个 ； 1 0 0 0 将 过 滤 体 积 的 单 位 由 m l 转 换 为 L ； f 样 品 接 种 量 ， m l ； 注若平行样结果都在 2 0 ～6 0 C F U / L 范围内，最终结果取平均值以几何平均计算。 1 0 . 3 结 果 表 示 测 定 结 果 保 留 至 整 数 位 ， 最 多 保 留 两 位 有 效 数 字 ， 当 测 定 结 果 ≥ 1 0 0 C F U / L 时 ， 以 科 学 计 数 法 表 示 。 粪 大 肠 菌 群 检 验 记 录 及 报 告 格 式 参 见 附 录 A 。 1 1 精 密 度 和 准 确 度 1 1 . 1 精 密 度 6 个 实 验 室 对 低 浓 度 （ 地 下 水 ， 浓 度 均 值 为 2 . 0 1 0 2 C F U / L ） 、 中 浓 度 （ 地 表 水 ， 浓 度 均 值 为 1 . 6 1 0 5 C F U / L ） 和 高 浓 度 （ 生 活 污 水 ， 浓 度 均 值 为 1 . 6 1 0 7 C F U / L ） 三 个 不 同 浓 度 粪 大 肠 菌 群 的 实 际 样 品 和 有 证 标 准 样 品 （ 浓 度 为 3 6 7 0 M P N / L ， 可 接 受 范 围 为 3 3 0 ～ 7 7 1 0 M P N / L ） 进 行 了 6 次 重 复 测 定 实 验 室 内 相 对 标 准 偏 差 范 围 分 别 为 5 . 3 ～ 1 2 、 0 . 8 1 ～ 2 . 1 、 0 . 5 1 ～ 4 . 2 和 7 . 7 ～ 9 . 8 ； 实 验 室 间 相 对 标 准 偏 差 分 别 为 6 . 8 、 3 . 9 、 4 . 0 和 3 . 6 ； 实 验 室 间 9 5 置 信 区 间 见 表 2 。 表 2 实 验 室 间 9 5 置 信 区 间 低浓度（ C F U / L ） 中浓度（ C F U / L ） 高浓度（ C F U / L ） 标准样品（ C F U / L ） 均值 9 5 置信区间 均值 9 5 置信区间 均值 9 5 置信区间 均值 9 5 置信区间 2 . 0 1 0 2 1 . 4 1 0 2 ～ 2 . 9 1 0 2 1 . 6 1 0 5 9 . 8 1 0 4 ～ 2 . 6 1 0 5 1 . 6 1 0 7 8 . 2 1 0 6 ～ 3 . 0 1 0 7 6 . 1 1 0 2 3 . 8 1 0 2 ～ 9 . 9 1 0 2 1 1 . 2 准 确 度 6 个 实 验 室 对 含 粪 大 肠 菌 群 浓 度 为 3 6 7 0 M P N / L （ 可 接 受 范 围 为 3 3 0 ～ 7 7 1 0 M P N / L ） 的 标 准 样 品 进 行 了 6 次 重 复 测 定 相 对 误 差 范 围 为 - 1 9 ～ - 3 2 ； 相 对 误 差 最 终 值 为 - 2 3 ± 1 0 。 注微生物检测数据为偏态分布，其测定结果全部经以 1 0 为底对数转换后进行计算。 1 2 质 量 保 证 和 质 量 控 制 1 2 . 1 培 养 基 检 验 更 换 不 同 批 次 培 养 基 时 要 进 行 阳 性 和 阴 性 菌 株 检 验 ， 将 粪 大 肠 菌 群 测 定 的 阳 性 菌 株 （ 如 大 肠 埃 希 氏 菌 E s c h e r i c h i a c o l i ） 和 阴 性 菌 株 （ 如 产 气 肠 杆 菌 E n t e r o b a c t e r a e r o g e n e s ） 配 成 适 宜 浓 度 ， 按 样 品 过 滤 （ 9 . 1 ） 的 要 求 使 滤 膜 上 生 长 的 菌 落 数 为 2 0 ～ 6 0 个 ， 然 后 按 培 养 （ 9 . 2 ）7 的 要 求 进 行 操 作 ， 阳 性 菌 株 应 生 长 为 蓝 色 或 蓝 绿 色 菌 落 ， 阴 性 菌 株 应 生 长 为 灰 色 、 淡 黄 色 、 无 色 或 无 菌 落 生 长 。 否 则 ， 该 次 样 品 测 定 结 果 无 效 ， 应 查 明 原 因 后 重 新 测 定 。 1 2 . 2 对 照 试 验 1 2 . 2 . 1 空 白 对 照 每 次 试 验 都 要 用 无 菌 水 做 实 验 室 空 白 测 定 （ 9 . 3 . 1 ） ， 培 养 后 的 培 养 基 上 不 得 有 任 何 菌 落 生 长 。 否 则 ， 该 次 样 品 测 定 结 果 无 效 ， 应 查 明 原 因 后 重 新 测 定 。 1 2 . 2 . 2 阳 性 及 阴 性 对 照 定 期 按 照 9 . 3 . 2 进 行 阳 性 及 阴 性 对 照 试 验 ， 阳 性 菌 株 应 呈 现 阳 性 反 应 ， 阴 性 菌 株 应 呈 现 阴 性 反 应 ， 否 则 ， 该 次 样 品 测 定 结 果 无 效 ， 应 查 明 原 因 后 重 新 测 定 。 1 3 废 物 处 理 使 用 后 的 废 物 及 器 皿 须 经 1 2 1 ℃ 高 压 蒸 汽 灭 菌 3 0 m i n 或 使 用 液 体 消 毒 剂 （ 自 制 或 市 售 ） 灭 菌 后 ， 器 皿 方 可 清 洗 ， 废 物 作 为 一 般 废 物 处 置 。 1 4 注 意 事 项 当 样 品 浑 浊 度 较 高 时 ， 应 选 用 其 他 方 法 。8 附 录 A （ 资 料 性 附 录 ） 粪 大 肠 菌 群 检 验 记 录 及 报 告 格 式 表 A . 1 粪 大 肠 菌 群 测 定 检 验 记 录 项目名称 检验日期 年 月 日 检验方法 方法依据 灭菌锅型号 出厂编号 培养箱型号 出厂编号 培
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